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采血卡干血斑法對不穩(wěn)定樣品的保存與一般的樣品處理法方相比具有一定優(yōu)勢。大多數(shù)的干血斑樣品可以在室溫條件下保存,但是對于不穩(wěn)定的分析物,低溫可以延長保存時間。如酰基肉堿在干血斑在儲存在室溫條件超過2周會出現(xiàn)因?yàn)樗庾饔枚环€(wěn)定的情況,但是儲存在-18℃條件下可至少在330d內(nèi)保持穩(wěn)定。
如果不進(jìn)行分析無德穩(wěn)定性試驗(yàn)(覆蓋樣品采集到分析過程),僅僅開展樣品的重復(fù)分析測定不能評價(jià)分析物的穩(wěn)定性。一般而言,分析物在DNA采血卡干血斑上的穩(wěn)定性需要考察一種或幾種儲存條件(-60℃、-15℃、2~8℃、18~22℃)。
(1)比較不同儲存周期的QC樣品(低、中、高3個濃度,一式3份)的測量值與標(biāo)示值的差異;
(2)比較真實(shí)樣品第一次測量值與經(jīng)過不同儲存周期后的測量值。前者稱為QC樣品穩(wěn)定性,后者稱為真實(shí)樣品穩(wěn)定性。QC樣品穩(wěn)定性的差異應(yīng)不超過標(biāo)示值的±15%。對于真實(shí)樣品的穩(wěn)定性,每一種儲存條件至少選擇20個樣品進(jìn)行重復(fù)分析,不選擇低于定量下限或者小于3倍定量下限濃度的樣品。重復(fù)測定的結(jié)果與兩次測定的平均值的比值應(yīng)在80%-120%,并且至少283的樣品 符合上述標(biāo)準(zhǔn)。真實(shí)樣品穩(wěn)定性的結(jié)果不僅闡明了目標(biāo)化合物(包括氨基或酯化的化合物)的穩(wěn)定性情況,還揭示了可能由水解或降解導(dǎo)致的轉(zhuǎn)化。任何明顯的濃度下降意味著目標(biāo)化合物的濃度顯著增加可能由代謝物轉(zhuǎn)化或者共軛分子水解引起。
另外,有必要將QC樣品放置在高溫條件下(30~40℃、40~50℃或50~70℃)或者凍融3次進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn),用來模擬樣品運(yùn)輸過程的極端條件或者樣品儲存在低溫環(huán)境的情況下。上述 QC樣品的測定要隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線和普通QC樣品,一至三份,并且偏差應(yīng)在標(biāo)示值和普通的±15%,這樣才能說明干血斑樣品在高溫或者凍融條件下使穩(wěn)定的。
有些化合物易發(fā)生酶降解,這種過程可能發(fā)生在干燥階段或者在點(diǎn)樣之前,但酶抑制劑又不方便在點(diǎn)樣前添加,因此必須對沒有經(jīng)過任何處理的分析物在全血中2~3h的穩(wěn)定性進(jìn)行考察,已覆蓋血樣采集和干燥過程。如果試驗(yàn)結(jié)果顯示樣品不穩(wěn)定,那么該化合物不適合干血斑點(diǎn)樣。