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采血卡廠家詮釋從頭發(fā)樣本中提取DNA

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采血卡廠家詮釋從頭發(fā)樣本中提取DNA

發(fā)布日期:2019-10-27 作者: 點擊:

采血卡廠家詮釋從頭發(fā)樣本中提取DNA

采血卡廠家詮釋從頭發(fā)樣本中提取DNA是,使用微觀玻璃研磨和有機溶劑提取方案的改進版本從毛干中分離DNA。由于這些方案使標本暴露于污染風險增加,本研究使用二硫蘇糖醇(DTT)(Hi-media)以光滑的化學消化方法取代了繁瑣的物理消化方法,因為它是一種相對較強的還原劑。高鹽含量和陰離子洗滌劑。將消化緩沖液(500μl; 10mM Tris-HCl,10mM EDTA,50mM NaCl20SDS,pH7.5)與40μl1MDTT一起加入1.5ml微量離心管中(至終濃度)~80mM240mM乙酸鈉,pH5.2)和15μl10mg/ ml蛋白酶K(至終濃度~0.3mg / ml; Himedia)。在渦旋之前將頭發(fā)樣品加入到該溶液中并在56℃下孵育2小時。孵育2小時后,再次渦旋樣品管,再加入40μl1MDTT15μl10mg/ ml蛋白酶K,然后溫和混合并在60℃下再孵育2小時或直到頭發(fā)完全溶解。

然后用等體積的苯酚:氯仿:異戊醇溶液(25241)從每個樣品中提取DNA,并通過將管倒置幾分鐘輕輕混合。將樣品以10,000g 4℃)離心(Eppendorf 5415R10分鐘,然后將上層水層轉(zhuǎn)移到新鮮的滅菌微量離心管中。加入RNaseA10μl,10mg / ml; Fermentas,Thermo Scientific)并保持在37℃溫育30分鐘。加入等體積的氯仿:異戊醇,再次在10,000g 4℃)下離心(Eppendorf 5415R10分鐘。將上層水層轉(zhuǎn)移到新鮮的滅菌微量離心管中,然后加入兩倍體積的冷凍異丙醇和十分之一體積的3M乙酸鈉。將樣品在-20℃下冷卻1小時以進行DNA沉淀。將樣品在10,000g4℃)下離心(Eppendorf 5415R10分鐘。棄去上清液,加入250μl70%乙醇,輕輕敲打沉淀,然后以10,000rpm進一步離心(Eppendorf 5415R10分鐘。棄去上清液,將沉淀物在層流氣流中風干,重懸于50μl無核酸酶水或1×TE緩沖液中,并在-20℃-80℃冷凍保存。

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