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采血卡廠家詮釋從血液樣本中提取DNA

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采血卡廠家詮釋從血液樣本中提取DNA

發(fā)布日期:2019-10-08 作者: 點擊:

采血卡廠家詮釋從血液樣本中提取DNA

關(guān)于DNA如何從血液中提取,下面由采血卡廠家為大家詮釋如何從血液樣本中提取DNA。首先通過使用低滲緩沖液(碳酸氫銨和氯化銨; Himedia)裂解紅細(xì)胞(RBC)來分離來自全血的淋巴細(xì)胞,對淋巴細(xì)胞具有最小的裂解作用。將三體積的RBC裂解緩沖液加入血液樣品中并通過渦旋混合并徹底倒置5分鐘并以20,00g離心(Eppendorf 5415R10分鐘。大部分上清液丟棄,留下約1ml以防止細(xì)胞損失。向沉淀中加入3體積RBC裂解緩沖液,并將渦旋,翻轉(zhuǎn)和離心步驟重復(fù)2-3次,直至獲得澄清的上清液和干凈的白色沉淀。 最后一次洗滌后,將上清液完全棄去,將沉淀重懸于500μlPBS中,然后加入400μl細(xì)胞裂解緩沖液(10mM Tris-HCl,10mM EDTA,50mM NaCl,10SDS,pH 7.5)和10μl蛋白酶K10mg / ml原液; Himedia)。將樣品渦旋以完全溶解沉淀,并在56℃下在水浴(CW-30G; Jeio Tech)中孵育2小時以進(jìn)行裂解。隨后將等體積的苯酚(用Tris平衡,pH8)加入管中并通過倒置1分鐘充分混合。將管在10,000g 4℃)下離心10分鐘,將含水上層轉(zhuǎn)移到含有等體積(11)苯酚和氯仿:異戊醇(241)的新管中。通過倒置將管混合1分鐘并以10,000g (在4℃下)離心10分鐘。 然后將上清液轉(zhuǎn)移到新管中,加入10μl10mg/ ml RNase AFermentasThermo Scientific)。

將樣品在37℃下孵育30分鐘,然后加入等體積的氯仿:異戊醇(241)并通過將管倒置1分鐘并在10,000g 4℃)下離心10分鐘進(jìn)行混合。將上清液轉(zhuǎn)移到新管中,加入兩倍體積的無水乙醇(Merck)并輕輕倒轉(zhuǎn)幾次并在-20℃下冷卻,然后在10,000g 4℃)下離心20分鐘。棄去上清液,加入250μl70%乙醇,輕輕敲打沉淀,然后以10,000rpm離心10分鐘并輕輕倒出上液。顆粒在層流氣流中風(fēng)干,將干燥的沉淀重懸于50μl無核酸酶的水或1×TE緩沖液中,并在-20℃-80℃冷凍儲存。

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