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1.收集血液
皮膚穿刺（ 圖1A ）
戴上一副一次性乳膠橡膠手套。在皮膚穿刺之前，患者應(yīng)該溫暖他/她的手。手指按順序進(jìn)行按摩，使血液流向穿刺部位。用合適的消毒劑（ 例如 70％異丙醇）清潔非書(shū)寫(xiě)手的第三或第四手指，手指的尖端遠(yuǎn)節(jié)點(diǎn)的手掌側(cè)的皮膚，用 一次性安全采血針刺破皮膚。手指應(yīng)保持在重力有利于指尖上的血液收集的位置。當(dāng)通過(guò)皮膚穿刺收集毛細(xì)血管血液完成時(shí)，在指尖上放置繃帶。
2.血斑的準(zhǔn)備
通過(guò)皮膚穿刺收集的血液制備（ 圖1B和1C ），用紗布?jí)|擦去第一滴血，因?yàn)樗赡芎卸嘤嗟慕M織液。再次按摩手指以增加穿刺部位的血流量。將下一個(gè)血滴轉(zhuǎn)移到過(guò)濾卡的一個(gè)圓圈上，不要直接用指尖接觸表面。僅通過(guò)毛細(xì)作用力將血液浸入過(guò)濾器的質(zhì)地中。讓指尖上的下一大滴毛細(xì)血管血液在下一個(gè)圓圈中收集。繼續(xù)此過(guò)程，直到所有必要的圓圈都被填滿(mǎn)或血流停止。如果血流量不足以填充過(guò)濾卡所需的所有圓圈，請(qǐng)勿過(guò)度擠壓或“擠”手指。 如果血流停止，則在指尖上放置繃帶。 如果檢查需要更多血液，則在另一根手指上進(jìn)行第二次皮膚穿刺。
3.血液干燥
為了干燥血斑，將濾紙放在生物危害安全柜中的干凈紙巾上，讓它們?cè)跊](méi)有任何外部熱源的情況下在室溫下干燥，優(yōu)選O / N（但至少4小時(shí)）。當(dāng)干燥過(guò)程完成時(shí)，血斑具有均勻的深褐色，并且不再可見(jiàn)紅色區(qū)域（ 圖1D ）
4.干血點(diǎn)的儲(chǔ)存和運(yùn)輸（DBS）
注意：干燥后可以中斷血斑的處理。采血卡現(xiàn)在可以存儲(chǔ)，儲(chǔ)存時(shí)，將濾紙卡放入一個(gè)不透氣的血樣袋中，該袋包含1到2個(gè)干燥劑袋，以保護(hù)樣品免受潮濕（ 圖1E ）。（可選）添加濕度指示卡。將此袋盡快轉(zhuǎn)移到溫度為-20°C或更低的冰箱中。如果在現(xiàn)場(chǎng)條件下無(wú)法使用冷凍機(jī)，則可在-4°C或甚至在環(huán)境溫度下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)14天。在干冰上運(yùn)輸冷凍DBS標(biāo)本。對(duì)于最初保持在環(huán)境溫度的采血卡，使用三重包裝系統(tǒng)，其由作為內(nèi)部容器的拉鏈袋以及內(nèi)部和外部封套組成。外包裝上不需要通過(guò)普通郵件裝運(yùn)內(nèi)容標(biāo)記，但必須將國(guó)際生物危害標(biāo)志貼在主容器上 。如果干燥劑包和/或附加濕度指示卡變?yōu)榉奂t色，則排除過(guò)濾卡進(jìn)一步處理。
5.干血斑的洗脫
使用一次性使用的6毫米設(shè)備從903級(jí)采血卡的每個(gè)血液浸泡的圓圈中打出一個(gè)點(diǎn)（ 圖1F）。將所有穿孔的干血斑從單個(gè)患者轉(zhuǎn)移到12孔板的一個(gè)孔中。用含有0.05％吐溫20和0.08％疊氮化鈉的磷酸鹽緩沖鹽水填充孔（ 圖1G ）。使添加的緩沖液的體積適應(yīng)用于隨后分析干血斑洗脫液的測(cè)定的最小相應(yīng)要求。重復(fù)這些步驟以獲得第二系列干血斑洗脫液以進(jìn)行分子分析。
將細(xì)胞培養(yǎng)板置于實(shí)驗(yàn)室振蕩器上，讓打孔干燥的血斑輕輕洗脫至少4小時(shí)，或優(yōu)選O / N（ 圖1H ）。
第二天，斑點(diǎn)幾乎沒(méi)有血液并且已形成溶血上清液（ 圖1I ）。將這些洗脫液轉(zhuǎn)移到微量離心管中。然后，使它們以10,500×g離心2分鐘（ 圖1J ）以從洗脫期間形成的任何碎片中釋放上清液（ 圖1K ）。
6.洗脫液分析
離心洗脫液現(xiàn)在可以用于預(yù)期的分析。使用市售試劑盒研究乙型肝炎病毒，丙型肝炎病毒和HIV感染標(biāo)志物的洗脫液，并仔細(xì)遵循各自制造商的說(shuō)明（ 圖1L ）。
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