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FTA采血卡紙是一種商業(yè)產(chǎn)品(Whatman)由浸漬了zhuanli混合化學(xué)品的濾紙組成,用于溶解細(xì)胞,防止細(xì)菌生長,并保護樣本中的DNA。
使用FTA采血卡紙純化DNA的基本前提很簡單:將生物樣品應(yīng)用于FTA采血卡紙并風(fēng)干。 然后取出FTA紙的小圓盤,并洗滌以去除任何非DNA材料(DNA仍然纏繞在紙中)。隨后可以對DNA進行分析,同時仍然附著在紙上,或者可以在使用前洗脫DNA。
在該新聞中給出了洗滌和加工程序的實例,以及以這種方式處理的DNA的實用性。
樣品選擇和收集
對于脊椎動物,選擇的常見樣本通常是血液或血液凝塊,因為細(xì)胞通常仍然存在并且DNA通常具有高質(zhì)量。處理后,每單位面積FTA采血卡的DNA濃度在每個物種中通常也相當(dāng)穩(wěn)定。這種可靠性通過在分析之前消除DNA定量的需要而簡化了許多程序。雖然更多變化,但在FTA上沉積的面頰擦拭物和唾液是令人滿意的樣品,盡管這些樣品包括一些已被凋亡核酸酶和細(xì)菌DNA損壞的DNA。只要動物的某些DNA完好無損,這些對PCR等程序都不重要; 然而,由于存在高度可變量的DNA,它可能引起擴增變異。
血液
將含有抗凝血劑的生血或血液滴在儲存紙上并放置3-5分鐘直至干燥。如果非常需要樣品沉積的均勻性(即對同一樣品進行多次分析),那么樣品應(yīng)該快速地運行到表面上,因為細(xì)胞在與紙接觸后很快就會裂解,并且樣品的非常緩慢的遞送往往導(dǎo)致局部化裂解,因此DNA的不均勻擴散??梢詫讉€直徑約為1厘米(20微升血液)的樣品放在同一張存儲紙上,理想情況是它們之間有小的空載“白色”區(qū)域,以確保紙張沒有嚴(yán)重超載并確保足夠的樣品分離。面積僅為1-2毫米的血液樣本對于至少1或2次分析是足夠的,并且多達(dá)50種依賴于物種。
血塊
死亡的動物或快速凝固的樣本可能使血凝塊成為唯一的DNA來源。理想情況下,將直徑3-5毫米的凝塊輕輕擠入屏蔽手指和拇指之間的FTA紙張紋理中。通過使用諸如聚乙烯之類的可丟棄塑料薄片的簡單護罩,避免了污染手指的交叉污染。 然后將紙干燥為液體血液樣品。 擠壓凝塊內(nèi)DNA的分布可能是不均勻的,大多數(shù)DNA位于該區(qū)域的中心2/3處。