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FTA采血卡中制備樣品的最佳做法
血源性傳染病的診斷主要依賴(lài)于檢測(cè)血液樣本中的致病因子。分子技術(shù)為此提供了敏感和特定的工具,盡管在現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境中使用這些方法存在相當(dāng)大的困難。在大規(guī)模流行病學(xué)研究中,FTA采血卡越來(lái)越受歡迎,可以快速收集和存檔大量樣品。然而,這些卡的下游處理存在一些困難,這對(duì)于準(zhǔn)確診斷感染是必不可少的。在這里,我們描述了使用PCR從FTA采血卡進(jìn)行樣本處理的最佳實(shí)踐方法的建議,用于錐蟲(chóng)病的分子診斷。
對(duì)五種技術(shù)進(jìn)行了比較。直接施用全血的檢測(cè)靈敏度(35.6%)低于全血,隨后使用螯合樹(shù)脂100(56.4%)從卡上洗脫。當(dāng)在FTA卡上施用血液之前裂解時(shí),獲得了更好的表觀敏感性(73.3%),盡管這并不重要。使用螯合樹(shù)脂100(73.3%)進(jìn)行后續(xù)洗脫后,這種情況沒(méi)有改善,與野外血液直接DNA提取無(wú)顯著差異(68.3%)。
基于這些結(jié)果,這些技術(shù)所需的努力程度以及現(xiàn)場(chǎng)條件下DNA提取的難度,我們建議將血液轉(zhuǎn)移到FTA卡上,然后在螯合樹(shù)脂100中作為最佳方法進(jìn)行洗脫。
在普通濾紙上常規(guī)采集血液和血沉棕黃層樣品,用于分析和檢測(cè)不同的血液病原體。盡管在濾紙上收集大量采樣的血液樣本似乎比其他采樣程序更方便,例如原位DNA提取,但濾紙不適合長(zhǎng)期儲(chǔ)存,因?yàn)樗鼈儾荒鼙Wo(hù)樣品免受破壞和退化。
(FTA)技術(shù)在這種基于紙張的系統(tǒng)上得到了改進(jìn)。FTA采血卡設(shè)計(jì)用于直接從組織中固定和儲(chǔ)存核酸,從而可以收集和存檔核酸。FTA基質(zhì)浸漬有蛋白質(zhì)變性劑,其導(dǎo)致細(xì)胞和任何接觸的生物體的裂解。此外,這些化學(xué)物質(zhì)在干燥過(guò)程中會(huì)抑制碎屑,以確??ㄆ陌踩幚矶淮嬖谏镂:Φ娘L(fēng)險(xiǎn)。FTA技術(shù)還包括螯合劑和自由基捕集阱,用于處理大氣污染物,從而在室溫下保護(hù)捕獲的核酸至少10年以上。