企業(yè)名稱：山東成武貝斯特實(shí)驗(yàn)器材有限公司
電話：0530-8997788
手機(jī)：15554087788 （微信同號(hào)）
郵箱：543715016@qq.com
網(wǎng)址：www.caregiversneeded.com
傳真：0530-8917788
地址：山東省菏澤市成武縣醫(yī)療器械產(chǎn)業(yè)園
新生兒采血卡廠家講解乙醇沉淀純化法
對(duì)于乙醇沉淀純化法，新生兒采血卡廠家講解如下：實(shí)驗(yàn)室臺(tái)式離心機(jī)，通過首先確保溶液中存在正確濃度的正離子來(lái)沉淀DNA（過多會(huì)導(dǎo)致大量鹽與DNA共沉淀，過少會(huì)導(dǎo)致DNA不完全恢復(fù)），然后加入2-3個(gè)體積的DNA至少95％的乙醇。許多方案建議此時(shí)在低溫下儲(chǔ)存DNA，但也有人認(rèn)為它可能無(wú)法改善DNA回收率，甚至可能在使用過夜培養(yǎng)時(shí)間時(shí)降低沉淀效率。因此，在室溫下可以實(shí)現(xiàn)良好的效率，但是當(dāng)考慮到可能的降解時(shí)，最好在濕冰上孵育DNA。最佳孵育時(shí)間取決于DNA的長(zhǎng)度和濃度。較小的碎片和較低的濃度將需要更長(zhǎng)的時(shí)間才能實(shí)現(xiàn)可接受的恢復(fù)。對(duì)于非常小的長(zhǎng)度和低濃度，建議進(jìn)行過夜孵育。在這種情況下，使用載體如tRNA ，糖原或線性聚丙烯酰胺可以大大提高恢復(fù)。
在孵育期間，DNA和一些鹽將從溶液中沉淀出來(lái)，在下一步驟中，通過在微量離心管中以高速（~12,000g）離心收集該沉淀物。 離心的時(shí)間和速度對(duì)DNA回收率的影響最大。再次，較小的片段和較高的稀釋度需要更長(zhǎng)和更快的離心。離心可以在室溫或4℃或0℃下進(jìn)行。在離心過程中，沉淀的DNA必須通過乙醇溶液移動(dòng)到管的底部，較低的溫度增加溶液的粘度，較大的體積使距離更長(zhǎng)，因此這兩個(gè)因素都降低了該過程的效率，需要更長(zhǎng)的離心以獲得相同的效果。離心后，除去上清液，留下粗DNA 沉淀 。顆粒是否可見取決于DNA的量和純度（更容易看到更臟的顆粒）或使用共沉淀劑。
在下一步中，將70％乙醇加入到顆粒中，輕輕混合以使顆粒松散并洗滌。這樣可以去除殘留上清液中的一些鹽，并與DNA沉淀結(jié)合，使最終的DNA更清潔。將該懸浮液再次離心，再次沉淀DNA，除去上清液。該步驟重復(fù)一次。
最后，將沉淀空氣干燥，并將DNA重懸于水或其它所需緩沖液中。重要的是不要使顆粒過度干燥，因?yàn)樗赡軐?dǎo)致DNA 變性并使其難以重懸。
異丙醇也可用于代替乙醇; 異丙醇的沉淀效率更高，使得一個(gè)體積足以沉淀。然而，異丙醇的揮發(fā)性低于乙醇，并且在最后一步中需要更多的時(shí)間進(jìn)行風(fēng)干。當(dāng)使用異丙醇時(shí)，顆粒也可能不太緊密地粘附在管上。
 | 服務(wù)熱線：0530-8997788 |
 | 電話：15554087788 （微信同號(hào)） |
 | 郵箱：543715016@qq.com |
 | 地址 ：山東省菏澤市成武縣醫(yī)療器械產(chǎn)業(yè)園 |
工作時(shí)間：周一至周日：8:00- 17:30
魯公網(wǎng)安備37172302372073號(hào)
在線咨詢
